HPLC法同時(shí)測(cè)定川芎藥材中阿魏酸、咖啡酸的含量

　　[摘要] 目的 建立HPLC法同時(shí)測(cè)定川芎藥材中阿魏酸和咖啡酸含量的方法。 方法 采用Kromasil -ODS（250mm×4.6mm，5?m）色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-0.5%醋酸水（35：65）；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：323nm。 結(jié)果 阿魏酸和咖啡酸的線性范圍分別為：13.62～257.4mg/mL （r=0.9996）和29.40～515.7mg/mL （r=0.9995）；平均回收率（n=6）分別為阿魏酸96.6%（RSD=0.8%）和咖啡酸95.6%（RSD=0.5%）。 結(jié)論 該法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，為全面評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地川芎藥材的質(zhì)量提供方法。
　　[關(guān)鍵詞] HPLC；阿魏酸；咖啡酸；川芎
　　[中圖分類號(hào)] R917 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）21-102-03
　　川芎（Rhizoma Chuanxiong）為傘形科植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort.）的干燥根莖，其所含主要有效成分有酚酸類、內(nèi)酯類、生物堿和揮發(fā)油等[1]，廣泛應(yīng)用于臨床治療。目前，對(duì)川芎中成分的含量測(cè)定多集中在阿魏酸、藁本內(nèi)酯和川芎嗪等的測(cè)定[2-4]。本研究將川芎藥材中阿魏酸和咖啡酸兩組分含量同時(shí)測(cè)定，并對(duì)不同產(chǎn)地的藥材進(jìn)行含量比較，以完善川芎的質(zhì)量控制。
　　1 試劑與方法
　　1.1 儀器
　　Agilent-1100型高效液相色譜儀，配有二極管陣列檢測(cè)器（DAD）、四元梯度泵、在線真空脫氣機(jī)和柱溫箱。超聲波清洗器（DS3120 DC），RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。
　　1.2 試劑
　　甲醇為色譜級(jí)，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。
　　1.3 試驗(yàn)用藥
　　阿魏酸、咖啡酸對(duì)照品（自制，經(jīng)HPLC檢測(cè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)均>99.0%）。川芎購(gòu)自四川等10產(chǎn)地，經(jīng)鑒定均為正品。
　　1.4 方法
　　1.4.1 溶液制備
　　1.4.1.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 分別取阿魏酸和咖啡酸對(duì)照品適量，用甲醇溶解，制成濃度分別為0.5008mg/mL和1.000mg/mL的對(duì)照品溶液。
　　1.4.1.2 供試品溶液的制備 選取不同產(chǎn)地的川芎藥材，粉碎過(guò)篩后，分別精密稱定粉末約1.0g，置錐形瓶中，然后加入0.5mol/L NaOH溶液50mL，超聲提取20min，共提取3次，冷卻，靜置，離心，取上清液，用稀HCl調(diào)pH=2，然后用乙酸乙酯等量萃取3次，合并萃取液，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，用甲醇復(fù)溶并稀釋至25mL量瓶中，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。
　　1.4.2 色譜條件 色譜柱：Kromasil -ODS（250mm× 4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.5%醋酸水（35：65）；檢測(cè)波長(zhǎng)：320nm；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：30℃。
　　2 結(jié)果
　　2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
　　按照上述樣品處理方法和色譜條件進(jìn)行測(cè)定，兩峰之間的分離度大于1.5；理論塔板數(shù)大于30 000；拖尾因子在0.95～1.05之間，均滿足定量要求。色譜圖見(jiàn)圖1。
　　（B）
　　1.咖啡酸；2.阿魏酸
　　2.2 線性關(guān)系的考察
　　分別精密量取阿魏酸和咖啡酸對(duì)照品溶液適量，配成混合對(duì)照品系列溶液，按照上述色譜條件，進(jìn)樣分析，以各自的濃度X（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到阿魏酸和咖啡酸回歸方程分別為：Y=5.339×104X+230.8，r=0.9996；Y=4.588×104X+470.2，r=0.9995。線性范圍分別為：13.62～57.40μg/mL和29.40～515.7μg/mL。
　　2.3 精密度試驗(yàn)
　　取阿魏酸和咖啡酸的中濃度混合對(duì)照品溶液，按照1.4.2色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次。分別測(cè)得阿魏酸和咖啡酸的峰面積，計(jì)算兩組分峰面積的RSD分別為0.3%和0.5%，精密度良好。
　　2.4 重復(fù)性試驗(yàn)
　　取6份同一產(chǎn)地川芎藥材粉末，精密稱定，按照1.4.1項(xiàng)下處理，按1.4.2色譜條件，進(jìn)樣分析。阿魏酸和咖啡酸含量的RSD分別為0.2%和0.2%。
　　2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
　　取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12h，按照2.1項(xiàng)下處理，按2.2色譜條件，進(jìn)樣分析。阿魏酸和咖啡酸峰面積的RSD分別為0.7%和0.3%。結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。
　　2.6 加樣回收率試驗(yàn)
　　取同一產(chǎn)地已知含量的川芎藥材粉末6份，加入已知濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，再加入0.5mol/L NaOH溶液至50mL，按照按2.2色譜條件進(jìn)樣分析并計(jì)算其加樣回收率。阿魏酸和咖啡酸的平均回收率分別為96.6%和95.6%，RSD分別為0.9%和0.5%。見(jiàn)表1。
　　2.7 樣品測(cè)定
　　取不同產(chǎn)地的川芎藥材粉末精密稱定1.00g，按照2.1項(xiàng)下處理，按2.2色譜條件，進(jìn)行分析，分別計(jì)算阿魏酸和咖啡酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。
　　3 討論
　　3.1 提取條件的優(yōu)化
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)考察不同酚酸類成分的提取方法[5-8]，比較了甲醇、甲醇-水、甲醇-5%甲酸水、0.5mol/L NaOH溶液這4種不同的提取溶劑，氯仿、乙酸乙酯等2種不同的萃取溶液，對(duì)樣品進(jìn)行提取分析后進(jìn)樣分析，通過(guò)考察阿魏酸和咖啡酸的含量，從而選擇了最佳的提取條件。
　　3.2 色譜條件的優(yōu)化
　　本實(shí)驗(yàn)考察了3根不同的色譜柱，分別為Waters-C18（150mm×3.9mm，4μm）；Venusil XBP C18（L）（250mm×4.6 mm，5μm）和Kromasil -ODS （250mm×4.6mm，5μm），綜合考慮選擇Kromasil色譜柱。參考藥典[9]選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm，此波長(zhǎng)可避免雜質(zhì)干擾且可較好的檢測(cè)該兩組分。

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