近10年貝母類藥材鑒定技術(shù)研究進(jìn)展

　　摘要：本文通過查閱近年來相關(guān)資料，從性狀、顯微、分子標(biāo)記、高效液相等鑒定，概述貝母類藥材鑒定技術(shù)近年來的研究進(jìn)展，為今后貝母類藥材的鑒定提供參考。
　　關(guān)鍵詞：貝母類藥材；鑒定技術(shù)；研究進(jìn)展
　　中圖分類號：R282.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI編號：10.14025/j.cnki.jlny.2016.10.028
　　貝母類藥材作為臨床上的常用藥，其來源復(fù)雜，經(jīng)常出現(xiàn)偽品。本文綜述貝母類藥材的鑒定方法，對今后的貝母類藥材的應(yīng)用有較高的實踐意義。
　　1 性狀鑒定
　　性狀鑒定主要是觀察完整的中藥及中藥飲片。唐生斌等運用性狀的不同特征對貝母類藥材及它的混淆品、偽品等進(jìn)行對比研究，得出不同樣品的性狀具有一定的差異，可以將性狀特征的差異作為貝母屬種間鑒別的參考依據(jù)。
　　浙貝母：扁圓球形，高10～20毫米，直徑10～35毫米，二瓣，類腎形，近等大，表面稍粗糙，類白色至淡黃色，內(nèi)表面淡棕色。
　　湖北貝母：扁圓球形，高6～22毫米，直徑6～35毫米，二瓣，類腎形，多數(shù)大小懸殊，表面稍粗糙（有的可見棕色斑點），類白色至淡棕色。
　　伊貝母：新疆貝母為類球形略扁，高5～10毫米，直徑6～12毫米，二瓣，月牙形，近等大，緊靠，類白色，表面光滑。伊犁貝母為圓錐形或類球形，高8～12毫米，直徑10～25毫米，二瓣，心形，近等大，類白色或淡黃色，表面稍粗糙。
　　平貝母：扁球形，高5～10毫米，直徑6～20毫米，二瓣，大小相近相對抱合，乳白色或淡黃白色，表面光潔。
　　川貝母：松貝為類圓錐形或近球形，高3～8毫米，直徑3～9毫米，二瓣，大小懸殊，呈懷中抱月形，類白色，表面光潔。青貝為類球形或扁球形，高4～14毫米，直徑4～16毫米，二瓣，大小相近，相對抱合，類白色，表面光潔。爐貝為長圓錐形或略扁斜，高7～25毫米，直徑5～25毫米，二瓣，大小相近，相對抱合，類白色或淺棕黃色，表面有的具有棕色斑點。
　　2 顯微鑒定
　　顯微鑒別是鑒別貝母類藥材的重要方法之一，可以通過藥材的粉末顏色，淀粉粒大小、形狀，層紋形狀、有無，臍點位置、形狀等多種因素進(jìn)行區(qū)別。
　　通過比較可知，浙貝母粉末為淡黃色，湖北貝母、川貝母、伊貝母、平貝母粉末為類白色。浙貝母區(qū)別于其他貝母的最大區(qū)別是可見草酸鈣針晶，川貝母、平貝母、伊貝母粉末均有多臍點單粒和復(fù)粒，川貝母中多臍點單粒數(shù)目最多，浙貝母中復(fù)粒最多。平貝母、浙貝母、伊貝母粉末中的淀粉顆粒邊界較光滑，湖北貝母有起伏，而川貝母有短分枝，這可分別作為鑒別湖北貝母和川貝母的一大特征。湖北貝母淀粉粒層紋最為明顯，這一特點也成為5種貝母中湖北貝母的最大鑒別特征。
　　3 薄層色譜（TCL）鑒定
　　黃小鷗等“采用了氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（40：40：15：10）的下層溶液和正己烷-醋酸乙酯-二乙胺（11：14：1：5）兩個溶劑系統(tǒng)作為鑒別湖北貝母、川貝母、平貝母、浙貝母和伊貝母薄層色譜法的溶劑系統(tǒng)，通過譜圖可知伊貝母中含有西貝母堿，無貝母素甲和貝母素乙，而其他四種貝母則含有貝母素甲和貝母素乙，無西貝母堿。吳曉民等運用薄層色譜法對不同品種、產(chǎn)地、采收期的平貝母和偽品之間進(jìn)行了比較和分析，其結(jié)果顯示，不同采收期及不同產(chǎn)地的平貝母譜圖相近，而不同品種的平貝母和平貝母偽品的譜圖之間有著明顯差異，所以采用薄層色譜（TCL）鑒定法可以對平貝母藥材的鑒別提供有利依據(jù)。
　　4 分子標(biāo)記鑒定
　　從分子遺傳學(xué)角度來看，基因型的差異是物種表現(xiàn)型的主要差異，即DNA序列上的差異，這種差異是個體的差異并且不受環(huán)境影響，所以通過對基因型差異的比較研究也能進(jìn)行植物分類和鑒定。同時隨著新科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展創(chuàng)新，出現(xiàn)了分子生物學(xué)鑒定方法，所以通過分子標(biāo)記技術(shù)對中藥基原植物及其飲片鑒定得到了極大的發(fā)展。
　　4.1 隨機(jī)引物擴(kuò)增多態(tài)性DNA（RAPD）
　　李玉鋒等運用RAPD技術(shù)分析了8種貝母其基因組DNA多態(tài)性以及構(gòu)建了樹狀聚類圖，結(jié)果顯示親緣關(guān)系最近的為產(chǎn)地相同的川貝母和康定貝母，但產(chǎn)地不同的伊貝母、浙貝母、平貝母與川貝母等相同產(chǎn)地的貝母遺傳距離相對較遠(yuǎn)。因此可知，地理的分布距離越小，貝母的遺傳差異性越小，反之則越大。尹春萍等對暗紫貝母和湖北貝母采用RAPD法篩選出特異性高的引物進(jìn)行準(zhǔn)確區(qū)分。龔伯奇通過RAPD技術(shù)進(jìn)行分析了青海省四個地區(qū)的暗紫貝母遺傳多樣性，通過獲得的多態(tài)性信息將每個樣地的樣品準(zhǔn)確地將聚類在一起。周潔采用RAPD標(biāo)記和ISSR標(biāo)記相結(jié)合的技術(shù)對12個浙貝母的品種進(jìn)行了分子鑒定，將地種植的貝母類群和磐安引種貝母劃分開，發(fā)現(xiàn)了RAPD的聚類結(jié)果與ISSR標(biāo)記得到的聚類結(jié)果基本一致，從而肯定了RAPD技術(shù)的鑒定準(zhǔn)確性。
　　4.2 簡單重復(fù)區(qū)間標(biāo)記技術(shù)（inter-simple sequencerepeat，ISSR）
　　通過對SSR技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)后得到了新型分子標(biāo)記技術(shù)，ISSR技術(shù)是以SSR序列為引物并在3"端或者5"端加上2～4個隨機(jī)核苷酸，PCR過程中使錨定引物引起特意位點的退火，使重復(fù)序列間DNA片段成功擴(kuò)增。因為不同物種、不同品種的SSR在基因組中的位置和數(shù)量均具有差異性，所以擴(kuò)增結(jié)果將不同，這種結(jié)果又叫做多態(tài)性。劉曉賢等對2個川貝母居群、1個皖貝母居群、1個東貝母居群和8個浙貝母居群采用ISSR-PCR技術(shù)進(jìn)行分析，結(jié)果表明和其他產(chǎn)區(qū)浙貝居群相比，磐安地區(qū)的浙貝居群有明顯的區(qū)別，且長期的留種栽培使磐安浙貝遺傳多樣性水平降低，所以形成了相對穩(wěn)定的遺傳。王果平等運用ISSR技術(shù)對新疆貝母屬的遺傳多樣性進(jìn)行聚類分析，把十種貝母分成三個類群。結(jié)果表明聚類在一起的為托里貝母、黃花貝母、小白花貝母和大白花貝母。趙鑫等㈣探究了Mg²⁺濃度、引物、dNTP和TagDNA聚合酶用量這四個要素對伊貝母ISSR-PCR擴(kuò)增的影響，并確定了伊貝母ISSR反應(yīng)體系，這對其他貝母屬藥用植物的ISSR反應(yīng)體系的建立具有指導(dǎo)作用。

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