斑花黃堇藥材中總生物堿的提取、定性鑒定和含量測定

　　摘要：目的：建立斑花黃堇中總黃酮的提取和定性定量方法。方法：應(yīng)用酸提堿沉法制備藏藥材斑花黃堇中不同 pH 梯度下不同極性的有機(jī)溶劑二氯甲烷、 乙酸乙酯、 正丁醇生物堿浸膏; 用六種生物堿沉淀試劑對所制備的八種生物堿浸膏進(jìn)行定性分析; 用標(biāo)準(zhǔn)品鹽酸小檗堿制作標(biāo)準(zhǔn)品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用紫外分光光度法測定所提取樣品溶液中生物堿成分的含量。結(jié)果：鑒定并測定出6個不同產(chǎn)地樣品中生物堿成分的相對含量在0.49%～1.18%。 結(jié)論：通過本研究可穩(wěn)定提取、定性并定量檢測出藏藥材斑花黃堇中生物堿成分的相對含量，該方法方便可行。
　　關(guān)鍵詞：斑花黃堇;提取;總生物堿;定性鑒別;含量測定
　　【中圖分類號】R574 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】2107-2306（2018）06-147-03
　　斑花黃堇 Corydalis conspersa Maxim.，別名：甘冬歐薷（西藏藏藥材名），為罌粟科紫堇屬多年生草本植物，產(chǎn)于甘肅西南部、青海中南部、四川西北部和西藏東部和中部，是生長在海拔4300m 以上高寒流石灘中的青藏高原特色藥用植物，全草用于治療瘟疫病燒傷、赤巴病（熱證）等，是重要的寒性藏藥藥材^[1-2]。藥理研究發(fā)現(xiàn)，罌粟科紫堇屬植物具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗焦慮、保肝、殺蟲、抗腫瘤等活性^[3-4]。研究采用酸提堿沉法提取并用有機(jī)溶劑萃取藏藥材斑花黃堇中的生物堿類成分^[5-8];通過生物堿鑒別試劑和通用的化學(xué)試劑對萃取的生物堿成分進(jìn)行定性分析^[9];應(yīng)用鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線紫外分光光度法來檢測藏藥材斑花黃堇中相對總生物堿的含量^[10]，對該品種的進(jìn)一步研究和開發(fā)具有重要的意義。
　　1 儀器及實驗材料
　　1.1 儀器
　　AL204電子天平（梅特勒—托利多儀器（上海）有限公司）
　　XB-5200B超聲波清洗儀（寧波新芝生物科技股份有限公司）
　　AYALA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀N-1100（上海愛朗儀器有限公司）
　　UV-2450 紫外-可見分光光度計（島津公司）
　　GZX-9096MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱（上海博弈實業(yè)有限醫(yī)療設(shè)備廠）
　　1.2 實驗材料
　　1.2.1 藥材
　　斑花黃堇植物于2017年8月采自青海省黃南州吉崗山^[11]，經(jīng)青海民族大學(xué)藥學(xué)院林鵬程教師鑒定為罌粟科紫堇屬藥材斑花黃堇，清洗陰干后粉碎備用。
　　1.2.2試劑
　　鹽酸小檗堿對照品（質(zhì)量分?jǐn)?shù)>98.5%，采購于中國藥品生物制品鑒定所）
　　鹽酸、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、95%乙醇、無水乙醇、氨水、氫氧化鈉、苦味酸、 鉬酸銨、碘-碘化鉀、碘化鉍鉀、濃硫酸、濃硝酸等試劑，均為分析純
　　2生物堿浸膏的制備及鑒定方法和結(jié)果
　　2.1 制備方法及百分得率結(jié)果分析
　　應(yīng)用 0.5%鹽酸浸泡藏藥材斑花黃堇藥材細(xì)粉（過 80 目篩）， 超聲提取三次， 每次 30 分鐘， 然后抽濾并合并濾液后， 用濃氨水、 2%氫氧化鈉調(diào)至不同 pH 值（pH8-9， pH10-11， pH12-13）， 靜置過夜后， 用二氯甲烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取堿性水液體， 獲得不同 pH 值及不同極性的生物堿部位， 將各個部位的萃取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮并回收有機(jī)溶劑， 將濃縮后的不同 pH 值及不同極性的生物堿萃取液體放置燒杯中揮發(fā)至干， 獲得不同極性的生物堿浸膏，稱取重量，與總藥材重量相比并乘以100%計算其百分得率。結(jié)果如表1所示，可看出：PH8～9，二氯甲烷萃取回收后總生物堿的重量得率為0.43%，最多的部分，乙酸乙酯部分得率最低，為0.19%;不同PH值，用二氯甲烷萃取部分的重量相對較多。
　　2.2 生物堿浸膏的鑒別反應(yīng)
　　2.2.1 鑒別試劑的配制
　�。�1）改良碘化鉍鉀溶液的配制方法
　　取次硝酸鉍 0.85g，加冰醋酸10ml與水40ml溶解后，加碘化鉀溶液（4→10） 20ml ，搖勻，即得，5 克硅鎢酸溶于100 毫升水中，加鹽酸至PH2左右。
　　（2）碘-碘化鉀試劑的配制方法化學(xué)試劑的配制方法
　　碘酒的配方如下：碘 25g，碘化鉀10g，乙醇：500mL;水：加至1000mL 配制時應(yīng)先將碘化鉀溶解于10mL 水中，配成飽和溶液。 再將碘加人碘化鉀溶液中然后加入乙醇， 攪拌溶解后，添加蒸餾水至1000mL。
　�。�3） 苦味酸試劑：1.5g 苦味酸溶于100ml 蒸餾水。
　�。�4） 鉬酸銨-濃硫酸配制方法
　　準(zhǔn)確稱取5g鉬酸銨，先用少量水溶解，然后移入100ml的容量瓶中，逐漸加水至 100ml 刻度線，混勻即可。如果需要其他體積按比例增加或縮小即可。
　　（5） 濃硝酸：原裝試劑，含量大于68%。
　　（6） 濃硫酸：原裝試劑，含量大于98%。
　　2.2.2 鑒別反應(yīng)方法
　　生物堿類成分均與多種生物堿沉淀試劑在酸性溶液（水液或稀醇液） 中產(chǎn)生沉淀反應(yīng)。 取浸膏約 100mg， 加溶劑溶解， 依次分別滴加苦味酸試劑、鉬酸銨-濃硫酸、碘-碘化鉀、改良的碘化鉍鉀試劑、濃硝酸、濃硫酸數(shù)滴，觀察顏色、氣味、 沉淀等現(xiàn)象并拍照記錄，對反應(yīng)現(xiàn)象匯總?cè)绫?所示。
　　2.2.3鑒別反應(yīng)匯總及分析
　　根據(jù)2.2.2鑒別反應(yīng)的現(xiàn)象歸納如表2所示，可看出二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇各個部分均跟生物堿沉淀試劑和濃硝酸、濃硫酸有不同顏色的沉淀反應(yīng)和褐化反應(yīng)，大多為黃棕色、黑色、酒紅色沉淀和溶液。
　　通過表2，可看出PH8～9二氯甲烷部分有明顯顏色的生物堿沉淀反應(yīng)，PH11乙酸乙酯有顏色，有些有沉淀，有些沒有沉淀，PH12～13有顏色，有些有沉淀、有些沒有沉淀，說明均不同程度的含有生物堿成分。

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