用一測多評的方法測量茶葉的有效成分的實驗設(shè)計

　　【摘要】本實驗采用hplc的方法，來測量不同茶葉的有效成分，大多實驗證明一測多評的方法是比較方便，快速，成功的驗證，測量了茶葉中的有效成分。
　　【關(guān)鍵詞】一側(cè)多評；茶葉
　　1.方法原理
　　在一定的范圍內(nèi)（線性范圍內(nèi)）成分的量（質(zhì)量或濃度）與檢測器響應(yīng)成正比，即：W=f*A。在多指標(biāo)質(zhì)量評價時，以茶葉中兒茶素為內(nèi)標(biāo)，建立該組分與其他組分之間的相對校正因子，通過校正因子計算其他組分的含量。這種測定一個成分，實現(xiàn)對多個成分定量的方法命名為一測多評法。
　　假設(shè)某樣品中含有i個組分Wi/Ai=Fi（i=1，2，…，k，…，m）①式中Ai；為組分峰面積；Wi為組分濃度。選取其中一組分（表兒茶素EC）k為內(nèi)標(biāo)，建立組分k與其他組分（GC，EGC，GCG，ECG）m之間的相對校正因子Fkm=Fk/Fm=Wk*Am/Wm*Ak ②Wm=Wk*Am/Fkm*Ak ③式中Ak為內(nèi)標(biāo)物峰面積，Wk為內(nèi)標(biāo)物濃度。Am為其他組分m峰面積；Wm為其他組分m濃度。
　　2. 實驗材料
　　2.11儀器
　　高效液相色譜儀，分析色譜柱，分析天平，電熱恒溫水浴，自動雙重純水蒸餾器，三角瓶，醫(yī)用注射器，0.2u m水系微孔濾膜。
　　2.12試劑
　　2.2
　　兒茶素類化合物標(biāo)樣：表兒茶素（EC）、沒食子兒茶素（GC）、表沒食子兒茶素（EGC）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）、沒食子兒茶素沒食子酸酯（GCG）。
　　高純水：18.2兆歐/cm；甲醇：色譜純，冰醋酸：分析純。
　　2.3茶葉
　　云霧綠茶，普洱茶，碧螺春綠茶（已有，且已打好粉）
　　3.實驗方法
　　色譜條件為：
　　檢測波長：278nm
　　流動相A為O.1%的乙酸溶液，流動相B為甲醇。
　　檢測器：紫外檢測器，二極管陣列檢測器
　　流動相洗脫梯度：流動相A：0.1%乙酸水溶液，流動相B：甲醇。
　　流動相梯度：從0到15 min，流動相B即有機(jī)相甲醇，從10%到60%；從15到20 min，流動相B保持在60%；從20到20.5 min，流動相B從60%回到10%；從20.5到25 min，整個分析周期結(jié)束，流動相B保持在10%。柱溫30℃；紫外檢測器檢測波長278 nm，檢測器掃描范圍200—350 nm；分析周期25 min，進(jìn)樣量10ul。
　　混合標(biāo)樣的配制標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別稱取5種兒茶素類化合物的固體標(biāo)樣各10 mg，用50%的甲醇水溶液溶解并定容至10 mL。則以上5種兒茶素類化合物的標(biāo)準(zhǔn)儲備液濃度均為1 mg/mL。混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：各取5種兒茶素類化合物的單標(biāo)儲備液1 mL，混合并用50%的甲醇水溶液定容至10 mL，則混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為100ug/mL
　　標(biāo)準(zhǔn)工作曲線混合溶液：先取100ug/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液5 mL，用50%的甲醇水溶液定容至10mL，得到50ug/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；再取100ug/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液I mL，用50%的甲醇水溶液定容至10 mL，得到10ug/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；再分別取0.5和2.5 mL的50ug/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用50%的甲醇水溶液定容至25 mL，分別得到1和5ug/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。最終得到的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線混合溶液的濃度分別為1、5、10、50、100ug/mL。
　　樣品處理過程：將樣品茶葉先進(jìn)行粉碎，過40目的篩子，再準(zhǔn)確稱量1.Og茶樣品放人三角瓶中，加入120 mL的純水，在70℃的水浴中浸提50 min，然后將上清液過O.2um水系微孔濾膜，裝入進(jìn)樣瓶中，即可用于分析。
　　4.方法學(xué)考察內(nèi)容及數(shù)據(jù)記錄
　　記錄
　　茶素標(biāo)樣，三種茶葉樣品的保留時間.
　　收集
　　1.色譜圖
　�。ò�括：標(biāo)樣色譜圖，樣品色譜圖）
　　2.茶素各組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程和相關(guān)系數(shù)
　　3. 校正因子計算
　�。ㄍ�標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以求出表兒茶素（EC）、沒食子兒茶素（GC）、表沒食子兒茶素（EGC）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）、沒食子兒茶素沒食子酸酯（GCG）的Wm，因此可以求出校正因子。）
　　4.兒茶素類化合物定量的結(jié)果
　　5.精密度實驗數(shù)據(jù)
　　6.重復(fù)性實驗數(shù)據(jù)
　　7.回收性實驗數(shù)據(jù)
　　討論與分析
　　鄧永亮在一種快速檢測茶葉中兒茶素的HPLC方法中寫道，本方法能夠同時對9種兒茶素類化合物組分進(jìn)行分析檢測，并使得各組分之間的分離度良好，同時整個分析周期只有25 min，因此是一種快速、高效、準(zhǔn)確的分析方法。本方法采用外標(biāo)法對兒茶素類化合物各組分進(jìn)行定量，所得到的各組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程線性良好，說明本方法的準(zhǔn)確性令人滿意[1]。王智民在“一測 多評"法中藥質(zhì)量評價模式方法學(xué)研究中寫道，用夾角余弦法對一測多評法的計算值與外標(biāo)法實測值進(jìn)行比較，評價一測多評法的準(zhǔn)確性和科學(xué)性。結(jié)果：建立了一測多評法方法學(xué)的考察模式；方法準(zhǔn)確性評價結(jié)果表明一測多評法的計算值與外標(biāo)法實測值之間沒有顯著性差異，實驗所得的校正因子[2]。
　　綜上所述一側(cè)多評的的方法是操作簡單，所使用的試劑、儀器均為較常使用的，這就大大降低了前處理過程的勞動強(qiáng)度，降低了實驗成本。
　　【參考文獻(xiàn)】
　　[1]鄧永亮，馮 雷，呂才有；一種快速檢測茶葉中兒茶素的HPLC方法；西南農(nóng)業(yè)學(xué)報；2011，24
　　[2]王智民，高慧敏，付雪濤，王維皓；“一測 多評"法中藥質(zhì)量評價模式方法學(xué)研究；中國中藥雜志；2006.3

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