HPLC法同時(shí)測(cè)定阿咖片中2種有效成分的含量

　　【中圖分類(lèi)號(hào)】R927.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-6851（2018）03--01
　　阿咖片作為解熱鎮(zhèn)痛藥，主要是由阿司匹林和咖啡因組成的復(fù)方制劑�，F(xiàn)行國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)采用的是滴定法分別測(cè)定2種成分，操作繁瑣，結(jié)果誤差大。本法采用HPLC法同時(shí)測(cè)定阿司匹林和咖啡因含量，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果精準(zhǔn)。
　　1 儀器與試藥
　　1.1 儀器 Waters e2695型高效液相色譜儀；2998PDAD型UV檢測(cè)器；Empower色譜工作站；PH計(jì)；超聲；天平
　　1.2 試藥 仁和阿咖片（江西制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：1411071 1401161 1502281）；阿司匹林對(duì)照品（批號(hào)：100113-201104，含量：100%，中檢院）；咖啡因?qū)φ掌罚ㄅ��?hào)：171215-201010，含量：100%，中檢院）；甲醇為色譜純；甲酸為分析純；純化水
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil Bos C18（4.6×200mm，5um）；柱溫：30℃；流動(dòng)相： 水（用甲酸調(diào)PH至2.6）-甲醇（70：30）；檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣體積：20ul，在該條件下，阿咖片中兩種成分的色譜圖見(jiàn)圖1
　　2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取阿司匹林和咖啡因?qū)φ掌愤m量，用流動(dòng)相溶解配制成含阿司匹林0.419mg/ml咖啡因0.0486mg/ml作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。
　　2.3 供試品溶液制備 取本品10片，稱(chēng)重并研細(xì)，精密稱(chēng)取粉末適量（約相當(dāng)于阿司匹林50mg）置100ml容量瓶，加流動(dòng)相適量，搖勻并超聲15分鐘，用流動(dòng)相稀釋至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液5ml置于25ml容量瓶，用流動(dòng)相稀釋至刻度即得。
　　2.4 方法學(xué)考察
　　2.4.1 線(xiàn)性關(guān)系 精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液1ml，2.5ml，5ml，10ml，15ml分別置于20ml容量瓶并用流動(dòng)相稀釋至刻度，分別進(jìn)樣20ul測(cè)定，以濃度（mg/ml）為X軸，峰面積為Y軸，計(jì)算得阿司匹林和咖啡因線(xiàn)性回歸方程分別為：Y 阿司匹林=7×106X-8015.8，R=1，Y咖啡因=5×107X-19819，R=0.9997。結(jié)果表明阿司匹林和咖啡因的線(xiàn)性范圍分別是1.15-314.25ug/ml與0.396-36.45ug/ml。
　　2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取阿司匹林和咖啡因混合對(duì)照品（濃度分別為0.1048mg/ml 0.0122mg/ml）20ul，重復(fù)進(jìn)樣6針，測(cè)得阿司匹林和咖啡因峰面積的RSD分別為0.40% 0.45%。
　　2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份混合對(duì)照品溶液，在0h 2h 4h 6h 8h依次進(jìn)樣測(cè)定，阿司匹林和咖啡因的RSD分別為1.6% 0.7%，結(jié)果表明8h內(nèi)阿司匹林和咖啡因的穩(wěn)定性良好。
　　2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取同一樣品（批號(hào)：1411071），照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣20ul，測(cè)定并計(jì)算阿司匹林和咖啡因的含量，RSD（n=6）分別為0.9% 1.0%。
　　2.4.5 耐用性試驗(yàn) 通過(guò)改變柱溫在25℃ 30℃ 35℃的條件下依次進(jìn)樣，測(cè)得阿司匹林和咖啡因峰面積的RSD分別為1.6% ，結(jié)果表明柱溫在25-35℃范圍內(nèi)對(duì)結(jié)果的影響很小。
　　2.4.6 加樣回收試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的樣品適量（約相當(dāng)于阿司匹林50mg），用流動(dòng)相溶解，超聲15分鐘后定容至100ml，取續(xù)濾液5ml定容至50ml作為本底，再分別取續(xù)濾液5ml，按其含量的80% 100% 120%各3份加入對(duì)照品儲(chǔ)備液混勻并定容至50ml即得。測(cè)得阿司匹林的平均回收率為98.1%（RSD=0.8%）和咖啡因的平均回收率為101.2%（RSD=0.2%）
　　2.5 樣品含量測(cè)定 按照本法條件，以外標(biāo)法分別測(cè)定3批樣品，計(jì)算阿司匹林和咖啡因的含量，結(jié)果見(jiàn)表2：
　　3 討論
　　3.1 酸堿度 阿司匹林易水解為游離的水楊酸，因此只有合理的調(diào)節(jié)PH才能有效地抑制水解，防止拖尾。而在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)加入適量的甲酸，阿司匹林峰型良好，無(wú)拖尾現(xiàn)象，而酸性過(guò)強(qiáng)會(huì)損害色譜柱，酸性不夠又沒(méi)法很好的抑制阿司匹林水解，因此選擇用甲酸調(diào)節(jié)PH至2.6，效果比較好。
　　3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定
　　取稀釋的對(duì)照品儲(chǔ)備液3份，分別進(jìn)行紫外掃
　　描，結(jié)果顯示阿司匹林和咖啡因在275nm處均有較大吸收，因此選擇275nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。
　　3.3 流動(dòng)相的選擇
　　我們比較了甲醇-水，乙腈-水，甲醇-乙腈-水三種流動(dòng)相系統(tǒng)，乙腈-水流動(dòng)相系統(tǒng)中阿司匹林和咖啡因色譜峰的分離度達(dá)不到要求，甲醇-乙腈-水系統(tǒng)色譜峰分離度較好，但色譜柱柱壓較高且容易基線(xiàn)漂移，因此，我們確定甲醇-水為本文的流動(dòng)相體系。
　　3.4 本試驗(yàn)建立了HPLC同時(shí)測(cè)定阿咖片中阿司匹林和咖啡因的分析方法，方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于阿咖片的含量測(cè)定。
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