藥用植物重樓遺傳多樣性及藥材質(zhì)量研究

　　摘 要：中藥重樓為百合科植物七葉一枝花及滇重樓的干燥根莖，有小毒，其微寒、味苦，具有消腫止痛、清熱解毒、定驚涼肝之功效。本文從植物資源學、生藥學、繁殖生物學、細胞學及分子生物學等領(lǐng)域?qū)χ兴幹貥沁M行分析，全面介紹其研究情況。中藥重樓目前研究較為滯后，急需加強其在大范圍資源調(diào)查與收集，深入研究群落的分布特征及規(guī)律、居群間與居群內(nèi)遺傳變異，系統(tǒng)闡述重樓遺傳變異程度及核心遺傳變異分布中心，逐步建立和完善重樓種質(zhì)資源庫，建立信息共享平臺，為重樓資源保護開發(fā)、核心種質(zhì)資源構(gòu)建及新品種（系）選育提供優(yōu)異材料和理論依據(jù)。
　　關(guān)鍵詞：重樓；資源；遺傳；藥用價值
　　中圖分類號：S567.19；S567.239 文獻標識碼：A
　　中藥重樓為百合科植物七葉一枝花（Paris polyphylla Smith var.chinensis（Franch.） Hara.） 及滇重樓（Paris polyphylla Smith var.yannanensis （Franch.） Hand.-Mazz.） 的干燥根莖，有小毒，其微寒、味苦，具有消腫止痛、清熱解毒、定驚涼肝的功效[1] �，F(xiàn)代藥理研究顯示，在臨床上重樓寬泛用于治療子宮出血、癌癥、流行性腮腺炎及慢支炎等疾癥，同時重樓的化學成分或提取物具有抑菌、消炎、抗腫瘤、止血、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等生物活性[2] 。在我國，它還是著名中成藥云南白藥、季德勝蛇藥片、宮血寧膠囊等主要原料藥材之一。
　　自20世紀90年代后，我國中藥及保健品行業(yè)對重樓的需求量日漸增大，僅云南省年需求量已達800t左右，而全國的年使用量則多達3000多t。除內(nèi)銷外，重樓還用于出口。近5年來，我國重樓的年出口量均在500t以上，且正以每年10%的幅度上升，當前，新鮮重樓市場價格已攀升至130～170元/kg。
　　眾所周知，我國每年所消耗的重樓資源，大多來自野生資源。然而，因其基原種質(zhì)不清，來源混雜，嚴重制約了重樓藥材質(zhì)量及其藥效穩(wěn)定性，種質(zhì)資源是提高中藥材質(zhì)量的關(guān)鍵和源頭，是中醫(yī)藥健康可持續(xù)發(fā)展的基本保證。有鑒于此，通過對重樓野生種質(zhì)資源形態(tài)學、分子生物學及資源化學等方面展開一系列應(yīng)用基礎(chǔ)性研究工作，具有重要戰(zhàn)略意義與示范性價值。
　　1 資源學
　　重樓屬種類分布較廣，資源較豐富，但近年的無序開發(fā)濫采，致使資源流失嚴重。羅明華[3] 對峨眉山重樓屬的研究中，分析了其種類分布與部分種年生長特征的情況，同時結(jié)果顯示，重樓屬植物有8種3變種在峨眉山，大多數(shù)的種類喜濕潤蔭蔽及微酸性或中性肥沃土壤，并生長在海拔900～1500m的常綠闊葉林、竹林或灌木林下。鐘延瑜等[4] 的調(diào)查研究認為四川重樓屬藥用植物有10種7變種，并進行了鑒定。另外，四川攀枝花地區(qū)是一優(yōu)產(chǎn)高效區(qū)域，重樓生長產(chǎn)量俱佳[5] 。包維楷等[6] 認為海南重樓喜生于林下暖和高濕的氣候環(huán)境，其研究調(diào)查了海南重樓種群在海南島尖峰嶺林區(qū)的生存狀況。黑龍江北重樓的資源調(diào)查，顯示四花臺草—毛棒—色木械—紫鍛是黑龍江北重樓的最佳生境[7]。在貴州重樓屬植物研究中，何順志[8]整理鑒定出貴州的重樓屬藥用植物11種，7變種和2變型，其中1種為新種，2種和1變種及1變型為貴州分布新記錄。在滇重樓研究上，滇重樓在云南3個地區(qū)的情況已被調(diào)查與分析。分析發(fā)現(xiàn)，在大生境方面，滇重樓各居群比較一致，但各居群間存在一定的生態(tài)隔離[9] 。同時存在一重要問題，滇重樓的野生資源已經(jīng)遭到嚴重的破壞，特別是在在生態(tài)環(huán)境較差的地區(qū)和貧困地區(qū)其情況更為突出。因此，對于重樓屬植物的保護，應(yīng)該首先保護生境地，并有相應(yīng)的禁止采摘措施出臺，研究開辟實現(xiàn)重樓的規(guī)�；疓AP種植，保護重樓屬植物遺傳資源多樣性。
　　2 生藥學
　　重樓的性狀研究中，14個種可以通過形狀、表面特征（包括節(jié)間長度、顏色、莖痕、環(huán)節(jié)等）、根莖的粗細、依據(jù)斷面（角質(zhì)化或粉質(zhì)）及質(zhì)地等進行區(qū)分，從而開展比較研究[10] 。通過顯微觀察重樓根莖橫切面也可以鑒定不同種的重樓，例如北重樓根莖橫切面中，中柱內(nèi)無含針晶束的粘液細胞[11] ，與滕杰等[7] 觀察根莖（取材5mm）的中柱內(nèi)有粘液細胞不同，同時9種重樓也進行了該比較。另外，重樓屬與延齡草屬短小根莖易混淆。此外，還比較了粉質(zhì)重樓和膠質(zhì)重樓的異同，認為二者的藥用價值相同。
　　3 細胞學
　　20世紀30年代，重樓屬藥用植物的細胞學研究就已被開展。目前，在分類系統(tǒng)上，主要的26種重樓，已有22種進行了細胞學研究，僅有大理重樓、緬甸重樓、峨嵋重樓和卷瓣重樓等4種重樓除外。重樓的染色體倍性有2x、3x、4x、8x等多種情況，基本可劃分為三種類型：
　　3.1 二倍體種
　　占主要地位。統(tǒng)計顯示有共計14種，占全屬種類的52%，如南重樓、凌云重樓、海南重樓均是其中代表。
　　3.2多倍體種
　　共計2種，其一為染色體倍性恒定為8倍體日本重樓；其二為染色體倍性不統(tǒng)一，2n=3x，4x，5x，6x，大多數(shù)報道為異源4倍體的，亞洲北溫帶至歐洲的四葉重樓。
　　3.3種內(nèi)多倍體
　　在一些二倍體中，個體或個別居群時有多倍體的情況發(fā)生。如七葉一枝花、花葉重樓、五指蓮等。
　　4 分子生物學
　　隨著研究的深入，隨機擴增多態(tài)性DNA技術(shù)也應(yīng)用到了重樓屬藥用植物的研究上，分析其遺傳多樣性和種間關(guān)系，研究顯示重樓屬植物遺傳多樣性水平較高[12] 。同時，19個不同種的ITS區(qū)序列分析顯示，重樓屬可重新劃分為三個獨立的屬（Paris， Kinugasa， Daisw）。另外，海南重樓應(yīng)屬于較為進化的一個類群，并與側(cè)膜胎座亞屬的重樓有共同的起源；小重樓推測應(yīng)該是黑籽重樓的變種。多葉重樓的RAPD技術(shù)分析顯示了其4個居群與1個凌云重樓的居群的遺傳多樣性，結(jié)果表明其與凌云重樓遺傳距離較遠，而七葉一枝花與滇重樓有較近的親緣關(guān)系[13] 。4種重樓屬藥用植物的熒光原位雜交顯示了其18-26SrDNA的定位情況，4個種中C染色體短臂末端均有18-26SrDNA[14] 。

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