杜仲藥材薄層色譜鑒別研究

　　【摘要】目的：以杜仲藥材對(duì)照品、松脂醇二葡萄糖苷和京尼平苷酸為對(duì)照，建立杜仲藥材的薄層色譜鑒別。方法：采用硅膠G高效預(yù)制板，以三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸（1∶7∶1∶1）為展開劑上行展開。結(jié)果：考察不同的提取方法，展開劑和展開條件，最終確定實(shí)驗(yàn)方法。經(jīng)對(duì)5批藥材進(jìn)行試驗(yàn)均斑點(diǎn)清晰，分離度好。結(jié)論：鑒別方法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，可用于杜仲藥材的定性鑒別。
　　【關(guān)鍵詞】杜仲；松脂醇二葡萄糖苷；京尼平苷酸；薄層鑒別
　　【中圖分類號(hào)】R282.5【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2014）02-0008-02
　　杜仲藥材是被子植物門杜仲科杜仲屬植物的樹皮[1]，在中國(guó)藥典2010年版中，杜仲藥材的定性鑒別仍為外觀性狀及顯微鑒別，這種鑒別方法對(duì)于完整的杜仲藥材來說是可行的，但對(duì)于粉末狀藥材或藥材提取物等來說就不適應(yīng)。根據(jù)有關(guān)報(bào)道，杜仲的降壓成分主要是松脂醇二葡萄糖苷，屬于木質(zhì)素類化合物，其降壓作用明顯且未見不良反應(yīng)，且對(duì)動(dòng)物血壓有雙向調(diào)節(jié)功能，也是現(xiàn)行藥典定量成分。另外，杜仲藥材所含的京尼平苷酸具有一定的防癌、抗癌、抗腫瘤、抗輻射損害、抗氧化、抗衰老及調(diào)節(jié)血壓等作用。本文以杜仲藥材對(duì)照品、松脂醇二葡萄糖苷和京尼平苷酸為對(duì)照，建立了杜仲藥材的薄層鑒別方法，具有斑點(diǎn)清晰，分離度良好，操作簡(jiǎn)便，方法重復(fù)性好的特點(diǎn)。
　　1儀器和試藥
　　硅膠G高效預(yù)制板，索氏提取器，水浴鍋（DK-98-11A，天津市泰斯特儀器有限公司）。松脂醇二葡萄糖苷（批號(hào)111537-200501）、京尼平甘酸（批號(hào)111828-201102）、杜仲（批號(hào)121202-0301）均購(gòu)自貴州省食品藥品監(jiān)督管理局，藥材樣品經(jīng)貴州省食品藥品檢驗(yàn)所中藥檢測(cè)室鑒定為杜仲藥材。所用試劑均為分析純。
　　2方法研究與結(jié)果
　　2.1溶液制備方法
　　2.1.1供試品溶液采用《中國(guó)藥典》2010年版中對(duì)杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量測(cè)定的提取方法。取杜仲藥材2g，精密稱定，置索氏提取器中，加入三氯甲烷適量，加熱回流6h，棄去三氯甲烷液，藥渣揮去三氯甲烷，再置索氏提取器中，加入甲醇適量，加熱回流6h，提取液過濾回收甲醇至適量，轉(zhuǎn)移至10ml兩瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
　　2.1.2對(duì)照藥材溶液取杜仲對(duì)照藥材2g，精密稱定，置索氏提取器中，按照供試品溶液的方法制備即得。
　　2.1.3對(duì)照品溶液松脂醇二葡萄糖苷溶液的制備：取松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液。京尼平苷酸溶液的制備：取京尼平苷酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液。
　　2.2薄層條件的優(yōu)化
　　2.2.1展開劑及展開條件的考察和比較通過系列預(yù)試驗(yàn)，確定基本具體操作方法：分別吸取對(duì)照品溶液，對(duì)照藥材溶液和供試品溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，將展開劑倒于展缸中預(yù)飽和30min，薄層板預(yù)飽和20min展開后，上行展開，展距8cm.。取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液顯色。
　　考察石油醚-乙醚（7：3）；石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4：3：3：1）；石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（5：4：0.5：0.5）三種展開劑，試驗(yàn)結(jié)果表明，只有石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（5：4：0.5：0.5）可以將杜仲分離，但是分離效果亦不理想。經(jīng)進(jìn)一步對(duì)三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液展開系統(tǒng)的有關(guān)比例進(jìn)行調(diào)整，分別考察三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（3：5：1：0.5）；三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（1：7：1：1）；三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（1：8：1：1）。結(jié)果這三種展開劑都可以再薄層板上將杜仲藥材成分進(jìn)行分離，但是經(jīng)三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（3：5：1：0.5）展開的松脂醇二葡萄糖苷的Rf值太低，經(jīng)三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（1：8：1：1）展開的中松脂醇二葡萄糖苷的Rf值太高，只有三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（1：7：1：1）中的松脂醇二葡萄糖苷的Rf值較為恰當(dāng)，見表1。
　　2.2.2點(diǎn)樣方式和點(diǎn)樣量的比較考察點(diǎn)狀點(diǎn)和條帶狀點(diǎn)兩種方式，結(jié)果顯示，點(diǎn)條帶狀點(diǎn)比較容易出現(xiàn)拖尾且斑點(diǎn)分離不明顯，點(diǎn)狀點(diǎn)斑點(diǎn)比較清晰。在點(diǎn)樣量為3μl時(shí)，京尼平甘酸溶液和供試品溶液斑點(diǎn)均清晰，并且供試品斑點(diǎn)分離較好，但是對(duì)照藥材和松脂醇二葡萄糖苷溶液斑點(diǎn)過淺，在紫外燈下幾乎觀察不到，故把對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量增加到4μl，松脂醇二葡萄糖苷溶液的點(diǎn)樣量增加到6μl，結(jié)果分離效果明顯，斑點(diǎn)清晰。故確定京尼平甘酸溶液和供試品溶液點(diǎn)樣量為3μl，對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量為4μl，松脂醇二葡萄糖苷溶液的點(diǎn)樣量為6μl。
　　2.2.3檢視條件的選擇在日光條件下檢視供試品溶液的展開斑點(diǎn)，在與京尼平甘酸對(duì)照品對(duì)應(yīng)的位置上可顯相同顏色的斑點(diǎn)，但是與松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品對(duì)應(yīng)位置上的斑點(diǎn)太淺，不易辨認(rèn)。在紫外條件下，供試品溶液與京尼平甘酸和松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品對(duì)應(yīng)的位置上均可顯相同顏色的斑點(diǎn)，且斑點(diǎn)清晰，容易辨認(rèn)。綜合考慮，選擇紫外光源作為檢視條件。
　　2.2.4層析條件的驗(yàn)證薄層板：硅膠G高效預(yù)制板；點(diǎn)樣：點(diǎn)狀點(diǎn)樣，京尼平甘酸溶液和供試品溶液點(diǎn)樣量為3μl，對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量為4μl，松脂醇二葡萄糖苷溶液的點(diǎn)樣量為6μl；展開劑：三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（1：7：1：1）為展開劑。展缸預(yù)飽和30min，上行展開8cm，顯色：噴以5%香草醛硫酸溶液顯色，在100℃加熱顯色至斑點(diǎn)清晰。檢視光源：紫外光。結(jié)果如圖1、2。
　　3討論
　　杜仲的薄層鑒別報(bào)道中[4-6]，一般只采用松脂醇二葡萄糖苷作為對(duì)照，本研究設(shè)立了對(duì)照品藥材、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸三個(gè)對(duì)照，從而可提高杜仲藥材定性鑒別的專屬性和可控性。同時(shí)，以本研究確定的展開系統(tǒng)鑒別杜仲藥材，經(jīng)多批次樣品試驗(yàn)表明方法的重現(xiàn)性良好。對(duì)于樣品溶液的制備，曾探討過多種方法，但都不能有效的去除杜仲膠等雜質(zhì)，最終選擇2010年版《中國(guó)藥典》中對(duì)于松脂醇二葡萄糖苷的提取方法。從薄層板的結(jié)果可知，供試品分離效果良好，在實(shí)際檢測(cè)中，杜仲藥材薄層鑒別的供試品溶液可直接利用其含量測(cè)定的提取溶液進(jìn)行試驗(yàn)。
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