RP—HPLC測定救必應藥材中紫丁香苷的含量

　　[摘要] 目的 建立反相高效液相色譜法 （RP-HPLC）測定救必應藥材中有效成分紫丁香苷的方法。 方法 采用Aglient 5HC-C18（2） 250 mm×4.6 mm色譜柱；流動相：甲醇（A）-0.5%醋酸水（B）為流動相系統(tǒng)梯度洗脫（0～25 min，25%→35%A；25～60 min，35%→60%A）；檢測波長：290 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：30℃；進樣體積：10 μl。 結(jié)果 紫丁香苷的線性范圍為0.3051～6.102 μg（r=0.9992），平均回收率為99.67%。 結(jié)論 RP-HPLC檢測效率高，專屬性強，重復性好，可用于救必應藥材中有效成分紫丁香苷的定量測定，可作為該藥材的質(zhì)量控制方法之一。
　　[關鍵詞] 救必應；紫丁香苷；質(zhì)量控制；反相高效液相色譜法
　　[中圖分類號] R284 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2016）01（c）-0075-02
　　[Abstract] Objective To establish a method for RP-HPLC determination of syringin in Ilex rotunda Thunb.. Methods A Kromasil-C18 Column （250 mm×4.6 mm） was used with gradient elution using methanol-0.5% acetic acid as mobile phase.The detection wavelength was 290 nm and the column temperature was 30℃ with the flow rate of 1.0 ml/min，the samplem injection was 10 μl. Results Linear ranges of syringin was 0.3051-6.102 μg （r=0.9992），respectively.Its average recoveries was 99.67%. Conclusion The RP-HPLC method established in this experiment can be used to determine the contents of syringin in Ilex rotunda Thunb..The method can also be used as the standard for the quality control of Ilex rotunda Thunb. because of simplicity，reliability and accuracy.
　　[Key words] Ilex rotunda Thunb.；Syringin；Quality control；Reverse phase high performance liquid chromatography
　　救必應別名白木香、白沉香、山冬青等[1-2]，來源于冬青科植物冬青（Ilex rotunda Thunb.）的干燥樹皮。夏、秋二季剝?nèi)�，曬干，具有清熱解毒，利濕止痛，用于暑濕發(fā)熱，咽喉腫痛，濕熱瀉痢，脘腹脹痛，風濕痹痛，濕疹，瘡癤，跌打損傷[3]。其主要含有三萜類、黃酮類、酚類、鞣質(zhì)類化學成分[4-5]，紫丁香苷是救必應藥材的主要有效成分之一[6]。HPLC法測定救必應藥材中紫丁香苷含量[7-10]，此方法簡便、準確、重復性好等特點，適用于救必應藥材中紫丁香苷的含量測定。本研究采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）對其進行含量測定。
　　1 儀器與材料
　　1.1 儀器
　　Waters e2695高效液相色譜系統(tǒng)，Empower工作站，含四元梯度泵、自動進樣器、紫外檢測器（Waters公司；KQ-100B型超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；T-214型電子分析天平（Denver公司）。
　　1.2 材料
　　紫丁香苷對照品（批號111574200603）購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用；冰乙酸（天津市化學試劑研究所，色譜純）；甲醇（Honeywell公司，色譜純）；水為超純水（實驗室制備）。救必應藥材12批，收集于各藥材市場或產(chǎn)地采集，由湖南中醫(yī)藥大學龔力民講師鑒定為冬青科植物冬青的干燥樹皮。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 色譜條件
　　色譜柱Aglient 5HC-C18（2）250 mm×4.6 mm，流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：290 nm；進樣體積：10 μl；流動相：甲醇（A）-0.5%醋酸（B）為流動相系統(tǒng)梯度洗脫（0～25 min，25%→35%A；25～60 min，35%→60%A）。按照上述色譜條件測定，待測成分紫丁香苷分離好，無干擾（圖1）。
　　2.2 供試品溶液制備
　　取藥材粉末（過60目篩）約1 g，精密稱定，置100 ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 ml，密塞，稱重，超聲處理（功率160 W，頻率59 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。
　　2.3 對照品溶液的制備
　　精密稱取紫丁香苷對照品適量，加甲醇溶解定容至10 ml，得到濃度為1.2204 mg/ml的對照品溶液，再稀釋約4倍，得到約0.3051 mg/ml的對照品溶液。
　　2.4 標準曲線的制備
　　分別精密吸取“2.3”項下的紫丁香苷對照品溶液1、3、5、8、10、15、20 μl進樣分析，記錄按上述色譜條件測定的峰面積。以峰面積為縱坐標（Y），進樣體積（μl）為橫坐標（X），得紫丁香苷的線性回歸方程分別為：Y=182 081X-106 174，r=0.9992，結(jié)果說明紫丁香苷在0.3051～6.102 μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關系。

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