不同產(chǎn)地廣東紫珠藥材苯乙醇苷類成分含量與抗氧化能力的相關(guān)性

　　摘要： 采用超聲提取廣東紫珠中的連翹酯苷B和金石蠶苷，用HPLC法測(cè)定其含量，并考察其與抗氧化活性的相關(guān)性。色譜柱為sunfire C18 4.6 mm×250 mm色譜柱；流動(dòng)相為乙腈：水（含0.1%甲酸）的溶液（18 ∶ 82）；檢測(cè)波長(zhǎng)為332 nm�？寡趸�活性采用DPPH法和鐵氰化鉀還原法測(cè)定。測(cè)定結(jié)果，廣東紫珠藥材中連翹酯苷B和金石蠶苷含量最高的分別來自江西武寧和萍鄉(xiāng)蘆溪，相關(guān)性分析結(jié)果表明，連翹酯苷B和金石蠶苷含量與廣東紫珠抗氧化能力均有一定的正相關(guān)性。表明不同產(chǎn)地廣東紫珠藥材中連翹酯苷B和金石蠶苷的含量有顯著差異；苯乙醇苷類成分為廣東紫珠中主要的抗氧化成分，與自由基清除率和總還原力呈正相關(guān)。
　　關(guān)鍵詞： 廣東紫珠；連翹酯苷B；金石蠶苷；抗氧化活性
　　中圖分類號(hào)： R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2016）03-0273-03
　　廣東紫珠（Callicarpa kwangtungensis Chun.）為馬鞭草科紫珠屬多年生落葉小灌木，莖枝以及葉入藥，收錄于2010版國(guó)家藥典，具有收斂止血、清熱解毒等作用[1]。廣東紫珠以地上部位入藥，其中的苯乙醇苷類成分被認(rèn)為是其主要化學(xué)成分，目前，研究者從中分離到10余種該類化合物[2-3]。相關(guān)研究表明，植物中的苯乙醇苷類成分具有較好的抗氧化活性[4]。相關(guān)學(xué)者對(duì)廣東紫珠的抗氧化作用進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明，廣東紫珠的各極性部位均有不同程度清除 DPPH·、OH·的能力[5]。目前，對(duì)廣東紫珠藥材的抗氧化活性研究還較少，苯乙醇苷類具體成分與抗氧化能力之間的相關(guān)性研究還未見報(bào)道。因此，本試驗(yàn)首先利用HPLC法測(cè)定了12個(gè)不同產(chǎn)地的廣東紫珠中連翹酯苷B和金石蠶苷2種苯乙醇苷類成分，同時(shí)測(cè)定了12個(gè)不同產(chǎn)地廣東紫珠的DPPH清除率和總還原力，并對(duì)二者數(shù)據(jù)進(jìn)行了相關(guān)性分析，對(duì)廣東紫珠藥材的抗氧化作用進(jìn)行研究，以期為更好地綜合開發(fā)利用廣東紫珠資源提供參考。
　　1 材料與方法
　　1.1 儀器
　　Waters 2695高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器2489，美國(guó)Waters公司生產(chǎn)；UV-752紫外分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司生產(chǎn)；CP214型分析天平，奧豪斯儀器有限公司生產(chǎn)；超聲清洗器，潔康超聲波有限公司生產(chǎn)；超聲波功率 120 W，頻率40 kHz；RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮公司生產(chǎn)。
　　1.2 藥品
　　2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH）購(gòu)于西格瑪公司上海辦事處；連翹酯苷B和金石蠶苷對(duì)照品購(gòu)自南京澤朗醫(yī)藥有限公司，純度經(jīng)檢驗(yàn)大于98%；乙腈為色譜純鐵氰化鉀、三氯乙酸、三氯化鐵、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、甲醇、甲酸等均為分析純；水為娃哈哈純凈水。
　　1.3 材料
　　廣東紫珠藥材采自12個(gè)不同產(chǎn)地，藥材來源見表1，經(jīng)江西省林業(yè)科學(xué)院鑒定為馬鞭草科紫珠屬植物廣東紫珠（Callicarpa kwangtungensis Chun.）的地上部分。
　　1.4 方法
　　1.4.1 樣品溶液的制備
　　1.4.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精確稱取連翹酯苷和金石蠶苷對(duì)照品各5.00 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，精確量取各標(biāo)準(zhǔn)品溶液1 mL，混勻，制得混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，進(jìn)樣前用微孔濾膜過濾，去雜質(zhì)，備用。
　　1.4.1.2 樣品溶液的制備 取干燥廣東紫珠藥材，粉碎，過50目篩，精確稱定2 g，置具塞錐形瓶中，加入50%乙醇20 mL，36 ℃超聲提取30 min，提取2次，靜置，過濾，合并2次濾液，并濃縮定容至20 mL，0.45 μm微孔濾膜過濾，備用。
　　1.4.2 廣東紫珠中苯乙醇苷成分含量測(cè)定 色譜條件：色譜柱為sunfire C18 4.6 mm×250 mm色譜柱；流動(dòng)相為乙腈 ∶ 水（含0.1%甲酸）為18 ∶ 82；檢測(cè)波長(zhǎng)為332 nm；流速為 1 mL/min；柱溫為25 ℃；進(jìn)樣量10 μL。
　　1.4.3 抗氧化活性測(cè)定方法
　　1.4.3.1 自由基清除活性測(cè)定方法（DPPH法）[6] DPPH用無水乙醇配制成0.039 4 mg/mL的溶液，置于棕色瓶中備用。取各廣東紫珠藥材提取液（按照“1.4.1.2”節(jié)的方法制備，并稀釋至濃度為0.1 mg/mL）3 mL，加入3 mL DPPH 標(biāo)準(zhǔn)液，于517 nm波長(zhǎng)處測(cè)得吸光值Di；以乙醇代替樣品溶液做空白試驗(yàn)，在 517 nm處測(cè)吸光值D0；另取3 mL溶液加3 mL 乙醇測(cè)得吸光度為Dj。根據(jù)以上數(shù)據(jù)算出清除率：
　　清除率=[1-（Di-Dj）/D0]×100%。
　　1.4.3.2 總還原力測(cè)定法（鐵氰化鉀法）[7] 在2.5 mL pH值6.6磷酸緩沖溶液中加入1 mL廣東紫珠樣品溶液（按照“1.4.1.2”節(jié)的方法制備，并稀釋至濃度為2.5 mg/mL）、2.5 mL 1% 鐵氰化鉀，混合物在 50 ℃恒溫條件下，加熱 20 min。急速冷卻，加2.5 mL 10%三氯乙酸，混勻后以3 000 r/min 離心10 min。取上層清液 2.5 mL，加2.5 mL蒸餾水再加0.5 mL 0.1% FeCl3，混合均勻，靜置10 min 后，在700 nm處測(cè)定吸光度。
　　2 結(jié)果與分析
　　2.1 廣東紫珠中連翹酯苷B和金石蠶苷含量測(cè)定方法學(xué)考察
　　2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定 分別精確稱取連翹酯苷B、金石蠶苷各5 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得對(duì)照品溶液。分別精確量取1 mL，混合，得混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣體積分別為1、4、8、12、16、20 μL，測(cè)定連翹酯苷B、金石蠶苷的峰面積，分別以連翹酯苷B、金石蠶苷的量（μg）為橫坐標(biāo)（x），峰面積為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，得到連翹酯苷B的回歸方程為：y=886 531x+284 290，r=0.995 1；金石蠶苷的回歸方程為：y=982 413x+371 749，r=0.9995。結(jié)果表明，連翹酯苷B和金石蠶苷在0.25～5.0 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好。標(biāo)準(zhǔn)品及樣品HPLC圖見圖1、圖2。

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