瀕危藥材金線蓮愈傷組織誘導(dǎo)及分化成苗研究

　　摘要[目的]建立有效的瀕危藥材金線蓮的再生體系，為其工廠化生產(chǎn)奠定技術(shù)基礎(chǔ)。[方法]選取福建金線蓮的葉片、莖片、帶節(jié)莖段、不定芽為外植體，建立無菌體系，而后以愈傷組織的誘導(dǎo)率為指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化不同外植體各階段（愈傷組織的誘導(dǎo)和分化）培養(yǎng)基中激素的種類及濃度。[結(jié)果]在試驗(yàn)的福建金線蓮4種外植體中，不定芽的愈傷組織誘導(dǎo)率最高，可達(dá)96.67%，其最適培養(yǎng)基配方為MS+0.5 mg/L NAA+4.0 mg/L BA+0.3 mg/L KT。在此培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)的愈傷組織在分化培養(yǎng)基MS+0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L BA和增殖培養(yǎng)基MS+0.2 mg/L NAA+2.0 mg/L BA上繼代形成了無根試管苗。[結(jié)論]該研究建立的無菌繁殖體系，解決了前人所指出的金線蓮愈傷組織誘導(dǎo)率極低的瓶頸問題，組培成苗的效率有較大提高。
　　關(guān)鍵詞金線蓮；不定芽；愈傷組織；分化成苗
　　中圖分類號(hào)S567.23+9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2017）14-0103-04
　　Abstract[Objective] The research aimed to establish an effective recycling system for Anoectochilus roxburghii， and lay the technical foundation for its industrial production. [Method] As explant of leaf， stem， stem segment with node and adventitious bud of Anoectochilus roxburghii， the aseptic system was established， and then the induction rate of callus was used as an index to optimize the type and concentration of hormones in the culture medium of different explants （callus induction and differentiation） by orthogonal design.[Result]In the test of Anoectochilus roxburghii， four explants， the callus induction rate of adventitious bud was the highest， up to 96.67%， the optimum medium formula was MS+0.5 mg/L NAA+4.0 mg/L BA+0.3 mg/L KT. On the basis of the medium， the callus was subcultured on the differentiation medium（MS+0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L BA） and the proliferation medium （MS+0.2 mg/L NAA+2.0 mg/L BA） to form a rootless test tube.[Conclusion]Asepsis reproductive system has been established， which solves the bottleneck problem that the predecessors pointed out that the callus induction rate of Anoectochilus roxburghii was very low，the efficiency of tissue culture seedlings have greatly improved.
　　Key wordsAnoectochilus roxburghii；Adventitious buds；Callus；Seeding differentiation
　　金線蓮[Anoectochilus roxburghii（Wall.） Lindl]，別名金絲線、金耳環(huán)等，蘭科開唇蘭屬多年生草本植物。金線蓮是我國(guó)珍稀瀕危的名貴藥材，素有“藥中之王”之稱，其全草均可入藥，有清熱涼血、祛風(fēng)利濕、解毒、止痛、鎮(zhèn)咳等功效。近年來，金線蓮在治療高血壓、糖尿病及腫瘤等疑難病癥方面日益引起醫(yī)藥界的重視，具有廣闊的開發(fā)利用前景。金線蓮的種子不易萌發(fā)，用傳統(tǒng)的實(shí)生繁殖相當(dāng)困難，且其栽培對(duì)生態(tài)環(huán)境要求嚴(yán)格，加之自然環(huán)境遭受嚴(yán)重破壞，生長(zhǎng)極其緩慢，且蟲鳥等動(dòng)物喜食，自然資源稀少，導(dǎo)致市場(chǎng)價(jià)格昂貴，高達(dá)3 000～5 000元/kg，不利于金線蓮的推廣。而植物組織培養(yǎng)技術(shù)作為一種無性繁殖的手段，可在短期內(nèi)提供大量?jī)?yōu)質(zhì)的試管苗，使其大面積推廣成為可能。目前，金線蓮的快速繁殖主要通過原球莖和叢生芽進(jìn)行培養(yǎng)物的大量繁殖[1-6]，而對(duì)愈傷組織的研究卻鮮見報(bào)道。因?yàn)榍o段受腋芽影響不能大量擴(kuò)增，并且外植體的數(shù)目也有限，光靠原球莖和叢生芽進(jìn)行組織快繁遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)需求。利用愈傷組織來培養(yǎng)可以對(duì)植物進(jìn)行快速繁殖，同時(shí)，也對(duì)植物改良、種質(zhì)保存有很大作用，這樣使得金線蓮的繁殖速度得到了最大化的提升。該試驗(yàn)采用金線蓮的不同組織（葉片、莖片、莖段及不定芽）作為外植體材料，通過愈傷誘導(dǎo)、分化、繼代、生根4個(gè)階段培養(yǎng)，形成大量?jī)?yōu)良試管苗，為金線蓮的規(guī)�；�生產(chǎn)提供可靠的技術(shù)保障。
　　1 材料與方法
　　1.1供試材料選擇生長(zhǎng)旺盛、無病蟲害的健壯金線蓮植株，摘取葉片、莖作為供試外植體材料。
　　1.2材料處理軟毛刷刷凈葉片、莖段、不定芽材料表面，放入小燒杯中罩上紗布后，流水沖洗30 min左右，置于超凈工作臺(tái)上，在75%酒精中浸泡30 s后，倒去酒精，再用0.1%HgCl2滅菌8 min，無菌水沖洗5～7次。將葉片切成0.5 cm2左右小塊，莖段切成1 cm左右小段和2 mm左右厚度的薄片，不定芽切下即可，無菌條件下接入準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。每瓶接4～6個(gè)外植體。

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