超高效液相色譜—電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)茶葉中洛伐他汀的含量

　　摘要：采用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀（UPLC-ESI-MS/MS），于多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式下建立了茶葉中洛伐他汀的定性定量分析方法。樣品經(jīng)甲醇超聲提取，Waters Acquity UPLC？誖BEH C18（1.7 μm，2.1 mm×50 mm）柱分離，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。在0.000 8～0.200 0 μg/mL間有良好的線性關(guān)系（R2>0.999 0），檢出限為0.000 2 μg/mL；在3個(gè)添加濃度水平下，平均加標(biāo)回收率為98.54%～ 109.86%；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）為1.45%～3.09%。該方法準(zhǔn)確、可靠、靈敏度高，適用于茶葉中洛伐他汀含量的檢測(cè)。
　　關(guān)鍵詞：茶；超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜；洛伐他��；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)
　　中圖分類(lèi)號(hào)：O657.63 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）11-2732-03
　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.11.045
　　Determination of Lovastatin in Tea Using Ultra Performance Liquid Chromatography-Electrospray Tandem Mass Spectrometry
　　WU Xiao-gang， LIU Bin-qiu， CHEN Xiao-quan， ZHANG Wei， HU Cheng-yun， LING Deng-meng
　　（Technology Center Laboratory of Menghai Tea Industry Co.， Ltd， TAETEA Group， Menghai 666200， Yunnan， China）
　　Abstract： An UPLC-ESI-MS/MS method with multiple reaction monitoring （MRM） mode was developed for the qualitative and quantitative analysis of lovastatin in tea. The sample preparation was based on ultrasonic-assisted extraction，Waters Acquity UPLC？誖BEH C18（1.7 μm，2.1 mm×50 mm） column separation and UPLC-MS/MS determination. The method showed a good linearity （R2>0.999 0） in the 0.000 8～0.200 0 μg/mL and LOD of 0.000 2 μg/mL. For three spiked levels，the average recoveries were from 98.54% to 109.86%， and the relative standard deviations （RSD，n=6） were from 1.45% to 3.09%. The method was reliable， accurate， sensitive and appropriate for the determination of lovastatin in tea.
　　Key words： tea； UPLC-ESI-MS/MS； lovastatin； multiple reaction monitoring （MRM）
　　1979年， Endo等[1]從Monascus ruber的培養(yǎng)液中分離出抑制HMG-CoA（3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A）還原酶活性的Monacolin K，同時(shí) Alberts等[2]于1980 年也從Aspergillus terreus中分離出與Monacolin K相同的物質(zhì)Mevinolin，后命名為洛伐他汀（Lovastatin），由Merk公司率先制成藥品上市。洛伐他汀是人體膽固醇合成中的關(guān)鍵酶HMG-CoA還原酶的抑制劑，因其療效好、副作用低，目前已被廣泛地應(yīng)用于臨床高血脂癥等疾病的治療。
　　普洱茶是以云南大葉茶[Camellia sinensis （Linn.） var. assamica （Masters） Kitamura]的曬青毛茶為原料，在微生物的作用下，經(jīng)漫長(zhǎng)的自然陳化或快速人工渥堆后發(fā)酵而成。目前，能產(chǎn)洛伐他汀的微生物已見(jiàn)報(bào)道[3]，如曲霉菌（Aspergillus）、紅曲霉菌（Monascus）、毛霉菌（Mucor）和青霉菌（Penicillium）等。Hwang等[4]首先在普洱茶中發(fā)現(xiàn)有洛伐他汀的存在；隨后，Yang等[5]研究指出洛伐他汀是在普洱茶中發(fā)現(xiàn)的惟一的他汀類(lèi)化合物，在乙酸乙酯提取物中含量較高，且全部以內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)存在，而在100 ℃普洱茶水提取物中含量較低，以內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)和羥酸結(jié)構(gòu)兩種形式存在；謝春生等[6]在普洱熟茶中也檢測(cè)出了洛伐他汀，洛伐他汀含量與普洱茶發(fā)酵程度成正比，其提取工藝和產(chǎn)品（制劑）也申請(qǐng)了國(guó)家發(fā)明專利。
　　國(guó)內(nèi)對(duì)洛伐他汀的測(cè)定始于20世紀(jì)90年代，最常見(jiàn)也是最典型的方法是高效液相色譜法，此外還有薄層掃描法和紫外分光光度法等。薄層層析法受試驗(yàn)條件干擾較大，方法的回收率較低；用紫外分光光度法對(duì)待測(cè)物檢測(cè)專屬性不強(qiáng)，準(zhǔn)確度也不高；高效液相色譜法檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，檢測(cè)效率低下。茶葉基質(zhì)的復(fù)雜性增加了洛伐他汀含量檢測(cè)的難度，近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（UPLC-MS）技術(shù)具有檢測(cè)靈敏度高、適用范圍廣、分析速度快以及可有效排除復(fù)雜基質(zhì)干擾等優(yōu)點(diǎn)，因而成為首選的檢測(cè)手段。但目前國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)利用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-ESI-MS/MS）檢測(cè)茶葉中洛伐他汀含量的文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本工作通過(guò)對(duì)茶葉中洛伐他汀物質(zhì)的提取、凈化及色譜-質(zhì)譜檢測(cè)條件進(jìn)行研究，建立了UPLC-ESI-MS/MS測(cè)定茶葉中洛伐他汀含量的方法。

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